Como o HPLC Funciona?

O nome Cromatografia vem da palavra grega Croma, que significa cor, e da palavra Graphein, que significa escrever. O primeiro uso registrado da cromatografia em coluna remete ao cientista russo Mikhail Tsvet, que macerou o carbonato de cálcio (fase estacionária) em um tubo (coluna de vidro) e adicionou folhas de plantas verdes homogeneizadas (amostra), seguidas por solvente orgânico (fase móvel). O resultado? Ele viu bandas coloridas separadas à medida que o solvente passava pelo tubo.

Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)

Acróstico do inglês High Performance Liquid Chromatography, é uma técnica de separação que utiliza a cromatografia como princípio norteador. Cada componente da amostra, de acordo com a interação química entre amostra (conhecida como analito) x solvente (chamada de fase móvel) x coluna (denominada fase estacionária), é isolado durante a análise, intitulada de corrida cromatográfica. Logo na sequência, o detector (PDA, Fluorescência, UV, etc.) identifica cada pico e o software torna isso visual e gera um relatório: O cromatograma.

Exemplo de cromatograma

Cromatografia líquida de ultra-alta eficiência (UHPLC)

Essa tecnologia é baseada no HPLC, entretanto, utiliza partículas menores, que aumentam a eficiência, velocidade de separação, além de resolução e sensibilidade superiores. Com a diminuição da partícula (menores que 2μm), a consequência natural é o aumento da pressão, que pode atingir incríveis 15000psi. Por isso os equipamentos UHPLC (do acróstico em inglês Ultra High Performance Liquid Chromatography), têm seus componentes muito mais resistentes, e preparados para trabalhar com volumes menores e pressões maiores, que o HPLC, fato que eleva seu custo de venda.

Exemplo do funcionamento de um HPLC

Problemas mais comuns do HPLC

Nós mencionamos que o HPLC e o UHPLC são equipamentos extremamente sensíveis e que trabalham com alta pressão, então a possibilidade de entupimento de algum componente pode trazer grandes problemas, que consumirão tempo e dinheiro. Na imagem anterior, indicamos em vermelho quais são os principais pontos de atenção para evitar esses problemas.

O entupimento mais comum acontece na pré-coluna e coluna, mas os danos podem ocorrer em todo o sistema, incluindo injetor e detector. Mesmo que a obstrução não ocorra, a lenta acumulação de partículas ao longo do tempo pode afetar a taxa de fluxo e criar interferências que reduzem a reprodutibilidade geral das análises.

Ou seja, o simples ato de filtrar sua amostra pode evitar que:

Substitua a coluna e pré-coluna antes do planejado;
Tenha gastos com manutenção;
Perca tempo investigando a causa do problema ou tendo retrabalho ao realizar a corrida novamente.

Como a Filtrilo pode te ajudar?

A Filtrilo oferece uma linha completa de Filtros de seringa, recomendados para a filtração de amostras, e Membranas filtrantes, utilizadas na remoção de partículas da fase móvel.

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Além dos problemas com entupimento, é preciso ter cuidado com a escolha do Vial, que, se não tiver um nível de pureza adequado, pode interferir negativamente em suas análises, diminuindo a precisão dos resultados e dificultando a repetibilidade das corridas. Por isso, para HPLC, UHPLC ou GC, oferecemos vials com excelente qualidade, preço justo e estoque imediato:

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