Cromatograma de análise por HPLC gerado em laboratório

Como o HPLC Funciona?

O nome Cromatografia vem da palavra grega Croma, que significa cor, e da palavra Graphein, que significa escrever. O primeiro uso registrado da cromatografia em coluna remete ao cientista russo Mikhail Tsvet, que macerou o carbonato de cálcio (fase estacionária) em um tubo (coluna de vidro) e adicionou folhas de plantas verdes homogeneizadas (amostra), seguidas por solvente orgânico (fase móvel). O resultado? Ele viu bandas coloridas separadas à medida que o solvente passava pelo tubo.

Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC)

Acrônimo do inglês High Performance Liquid Chromatography, é uma técnica de separação que utiliza a cromatografia como princípio norteador. Cada componente da amostra, de acordo com a interação química entre amostra (conhecida como analito) x solvente (chamada de fase móvel) x coluna (denominada fase estacionária), é isolado durante a análise, intitulada de corrida cromatográfica. Logo na sequência, o detector (PDA, Fluorescência, UV, etc.) identifica cada pico e o software torna isso visual e gera um relatório: O cromatograma.

Cromatograma
Exemplo de cromatograma

Cromatografia líquida de ultra-alta eficiência (UHPLC)                 

Essa tecnologia é baseada no HPLC, entretanto, utiliza partículas menores, que aumentam a eficiência, velocidade de separação, além de resolução e sensibilidade superiores. Com a diminuição da partícula (menores que 2μm), a consequência natural é o aumento da pressão, que pode atingir 15000psi. Por isso os equipamentos UHPLC (do acrônimo em inglês Ultra High Performance Liquid Chromatography), têm seus componentes muito mais resistentes, e preparados para trabalhar com volumes menores e pressões maiores, que o HPLC, fato que eleva seu custo de venda.

Diagrama do sistema HPLC com os principais pontos de risco de entupimento marcados em vermelho
Exemplo do funcionamento de um HPLC

Problemas mais comuns do HPLC

Nós mencionamos que o HPLC e o UHPLC são equipamentos extremamente sensíveis e que trabalham com alta pressão, então a possibilidade de entupimento de algum componente pode trazer grandes problemas, que consumirão tempo e dinheiro. Na imagem anterior, indicamos em vermelho quais são os principais pontos de atenção para evitar esses problemas.

O entupimento mais comum acontece na pré-coluna e coluna, mas os danos podem ocorrer em todo o sistema, incluindo injetor e detector. Mesmo que a obstrução não ocorra, a lenta acumulação de partículas ao longo do tempo pode afetar a taxa de fluxo e criar interferências que reduzem a reprodutibilidade geral das análises.

Ou seja, o simples ato de filtrar sua amostra pode evitar que:

  • Substitua a coluna e pré-coluna antes do planejado;
  • Tenha gastos com manutenção;
  • Perca tempo investigando a causa do problema ou tendo retrabalho ao realizar a corrida novamente.

Como a Filtrilo pode te ajudar?

A Filtrilo oferece uma linha completa de Filtros de seringa, recomendados para a filtração de amostras, e Membranas filtrantes, utilizadas na remoção de partículas da fase móvel.

Não sabe qual filtro utilizar? Confira nossa tabela de compatibilidade!

Além dos problemas com entupimento, é preciso ter cuidado com a escolha do Vial, que, se não tiver um nível de pureza adequado, pode interferir negativamente em suas análises, diminuindo a precisão dos resultados e dificultando a repetibilidade das corridas. Por isso, para HPLC, UHPLC ou GC, oferecemos vials com boa qualidade, preço justo e estoque imediato:

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